目前最為常用的重組蛋白表達質粒載體融合了復制子(Replicon)、啟動子(promoter)、篩選標簽(selection marker)、多克隆位點(MCS)和融合蛋白移出策略(fusion tag removal strategy)。
ELISA:基于酶催化底物產生顯色反應來檢測。CLIA:利用化學發(fā)光物質在化學反應中產生的發(fā)光信號進行檢測。
不同的抑制劑作用機制不同,有的抑制劑與底物競爭酶的活性中心,從而阻礙底物與酶的結合,稱為競爭性抑制;有的抑制劑與酶活性中心以外的基團結合,使酶的構象改變而不能與底物結合,稱為非競爭性抑制。
酶促化學反應中的反應物稱為底物,一個酶分子在一分鐘內能引起數(shù)百萬個底物分子轉化為產物,酶在反應過程中并不消耗。但是酶實際上是參與反應的,只是在一個反應完成后,酶分子本身立即恢復原狀,又能進行下一次反應。許多實驗證明,酶和底物在反應過程中形成絡合物。
固定劑與甲醛不同,戊二醛的這一步反應是不可逆的,而且需要氧氣的參與。由于大塊的樣品內部氧氣供應不足,戊二醛在大塊樣品的內部無法形成穩(wěn)定的生成物,會導致樣品內部的固定效果不佳。因而在使用戊二醛固定時,小塊的樣品固定效果較為理想。戊二醛通過交聯(lián)作用固定蛋白質的過程會伴隨氫離子的釋放,使樣品pH值降低。為了維持pH值穩(wěn)定在最佳水平,在戊二醛的固定劑中要加入足量的緩沖液。