細(xì)胞培養(yǎng)（cell culture）就是從機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)基 中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。體外細(xì)胞培養(yǎng)最常見(jiàn)的是合成培養(yǎng)基如DMEM,F12,MEM等混合一定比例的牛血清進(jìn)行培養(yǎng)；但是大量使用牛血清制品有許多缺陷，如，動(dòng)物源成分，無(wú)法用于臨床研究；成分復(fù)雜，批間差大，質(zhì)量不穩(wěn)定，重復(fù)性差，影響實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)，而且極易引起交叉污染；所以無(wú)血清培養(yǎng)正在替代有血清培養(yǎng)；
染色步驟包括：將培養(yǎng)的細(xì)胞或組織樣品制成單細(xì)胞懸液，然后將細(xì)胞放入管子或酶標(biāo)板中與熒光標(biāo)記或未標(biāo)記的抗體孵育。之后將細(xì)胞放入流式細(xì)胞儀中進(jìn)行分析。
ELISA是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的一種定量分析方法，樣本的處理對(duì)于實(shí)驗(yàn)的成功有著舉足輕重的作用。 利用進(jìn)行檢測(cè)的樣本類型包括常見(jiàn)的血液（血清、血漿），組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見(jiàn)的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰道分泌物等，這些樣本收集的時(shí)間、處理方法和保存都會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
染色時(shí)調(diào)節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時(shí)間長(zhǎng)，組織酸化而影響細(xì)胞核著色。因此，要在自來(lái)水中沖洗時(shí)間長(zhǎng)一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min，這樣可以使細(xì)胞核著色較深。染伊紅時(shí)胞漿著色不佳，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
細(xì)胞死亡是所有生物的基本過(guò)程，通過(guò)不同的機(jī)制發(fā)生。程序性細(xì)胞死亡的三種主要類型是凋亡、焦亡和壞死，每一種途徑都使用復(fù)雜的分子和細(xì)胞機(jī)制。盡管每種途徑都有特定的機(jī)制和結(jié)果，但它們具有共同的組成部分和特征。
WB實(shí)驗(yàn)中使用到的有三種抗體：一抗、二抗和內(nèi)參抗體。一抗是唯一針對(duì)目標(biāo)抗原的抗體，可以進(jìn)行制備也可以購(gòu)買(mǎi)現(xiàn)貨，難度系數(shù)較高；二抗直接買(mǎi)就OK，只是需要留意下種屬選擇；內(nèi)參抗體必不可少，是WB實(shí)驗(yàn)中的質(zhì)控環(huán)節(jié)。
抗體和重組蛋白無(wú)論是保存還是運(yùn)輸，請(qǐng)避免反復(fù)凍融。反復(fù)凍融，冰晶會(huì)破壞抗體和重組蛋白的空間結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致蛋白變性形成多聚體和重組蛋白構(gòu)象改變，從而降低抗體的結(jié)合能力，也加快了抗體球蛋白和重組蛋白的降解速度?？贵w和重組蛋白保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體和重組蛋白的活性使用效果，如果保存得當(dāng)，抗體和重組蛋白活性大部分都可以維持?jǐn)?shù)年。
PBS緩沖液是一種廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中的緩沖溶液，它的全稱是Phosphate Buffer Saline (PB)，中文通常稱為"磷酸鹽緩沖鹽溶液"或者"磷酸鹽緩沖生理鹽水"。這種溶液之所以能夠保持穩(wěn)定的pH值，主要得益于其中的磷酸緩沖對(duì)（H2PO4-和HPO42-）。
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