實(shí)驗(yàn)方法原理：
各種單糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀粉是非還原糖。利用溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來，再用酸水解法使沒有還原性的雙糖和多糖徹底水解成有還原性的單糖。在堿性條件下，還原糖將3,5-二硝基水楊酸還原為3-氨基-5-硝基水楊酸（棕紅色物質(zhì)），還原糖則被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)深淺的程度呈一定的比例關(guān)系，在540nm 波長(zhǎng)下測(cè)定棕紅色物質(zhì)的消光值，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可分別求出樣品中還原糖和總糖的含量。多糖水解時(shí)，在單糖殘基上加了一分子水，因而在計(jì)算中須扣除已加入的水量，測(cè)定所得的總糖量乘以0.9 即為實(shí)際的總糖量。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一、實(shí)驗(yàn)材料、儀器和試劑
1、實(shí)驗(yàn)材料：面粉。
2、儀器： (1) 25ml 血糖管或刻度試管×11；(2) 大離心管或玻璃漏斗×2；(3) 燒杯：100ml×1；(4) 三角瓶：100ml×1；(5) 容量瓶：100ml×3；(6) 刻度吸管：1ml×11、2ml×4、10ml×1；(7) 恒溫水??；(8) 沸水?。?9) 離心機(jī)(過濾法不用此設(shè)備)；(10)電子天平；(11)分光光度計(jì)；
3、試劑：
(1) 1mg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取 100 mg分析純葡萄糖(預(yù)先在 80 ℃烘至衡重)，置于小燒杯中，用少量蒸餾水溶解后，定量轉(zhuǎn)移至100ml的容量瓶中，以蒸餾水定容至刻度，搖勻，冰箱中保存?zhèn)溆谩?br>
(2) 3,5-二硝基水楊酸試劑：將6.3g 3,5-二硝基水楊酸和262ml 2NNaOH 溶液，加到500ml含有185g酒石酸甲鈉的熱水溶液中，再加5g結(jié)晶酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解。冷卻后加蒸餾水定容至1000ml，貯于棕色瓶中備用。
(3) 碘-碘化鉀溶液：稱取5g碘和10g碘化鉀，溶于100ml 蒸餾水中。
(4) 酚酞指示劑：稱取0.1g酚酞，溶于250ml 70%乙醇中。
(5) 6NHCl
(6) 6NNaOH
二、操作步驟
1、制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線：
取7支具有25ml刻度的血糖管或試管，編號(hào)，按下表所示的量，精確加入濃度為1mg/ml的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液和3,5-二硝基水楊酸試劑。
將各管搖勻，在沸水浴中加熱5分鐘，取出后立即放入盛有冷水的燒杯中冷卻至室溫，再以蒸餾水定容至25ml刻度處，用橡皮塞塞住管口，顛倒混勻（如用大試管，則向每管加入21.5ml蒸餾水，混勻）。在540nm波長(zhǎng)下，用0號(hào)管調(diào)零，分別讀取1-6號(hào)管的消光值。以消光值為縱坐標(biāo)，葡萄糖毫克數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2、樣品中還原糖和總糖的測(cè)定：
（1）樣品中還原糖的提?。?br>
準(zhǔn)確稱取2g食用面粉，放在100ml的燒杯中，先以少量的蒸餾水調(diào)成糊狀，然后加50ml蒸餾水，攪勻，置于50℃恒溫水浴中保溫20分鐘，使還原糖浸出。離心或過濾，用20ml蒸餾水洗殘?jiān)?，再離心或過濾，將兩次離心的上清液或?yàn)V液全部收集在100ml的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，混勻，作為還原糖待測(cè)液。
(2)樣品中非還原糖的水解和提?。?br>
準(zhǔn)確稱取1 g食用面粉，放在100ml 的三角瓶中，加入10 ml 6NHCl及15ml 蒸餾水，置于沸水浴中加熱水解30分鐘。取1~2 滴水解液于白瓷板上，加1滴碘-碘化鉀溶液，檢查水解是否完全。如已水解完全，則不顯藍(lán)色。待三角瓶中的水解液冷卻后，加入一滴酚酞指示劑，以6NNaOH中和至微紅，過濾，再用少量蒸餾水沖洗三角瓶及濾紙，將濾液全部收集在100ml的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，混勻。精確吸取10ml定容過的水解液，移至另一100ml的容量瓶中，定容，混勻，作為總糖待測(cè)液。
(3)顯色和比色：
取5支25ml刻度的血糖或刻度試管，編號(hào)，按下表所示的量，精確加入待測(cè)液和試劑。
注意事項(xiàng)：
其他：
1、用血糖管比大試管方便。
2、離心比過濾易得清液。
3、標(biāo)準(zhǔn)曲線制作與樣品含糖量測(cè)定應(yīng)同時(shí)進(jìn)行，一起顯色和比色。
