細(xì)胞培養(yǎng)中常見的“顆?！笨煞譃榘麅?nèi)和胞外兩種，很多小伙伴因?yàn)椴磺宄@些“顆?！钡膩碓矗ε挛廴径鴮⒓?xì)胞丟棄，不僅浪費(fèi)心力，還耽誤實(shí)驗(yàn)進(jìn)度，接下來我們逐步分析這些“顆?！碑a(chǎn)生的原因。
1、細(xì)菌或真菌污染
真菌污染相對(duì)來說比較好鑒別，一般肉眼可見培養(yǎng)基上層漂浮的霉斑或顯微鏡下可見菌體，細(xì)菌的菌體相對(duì)較小，顯微鏡下呈棒狀、球狀或者桿狀，由于細(xì)菌增值產(chǎn)生酸性物質(zhì)，短期內(nèi)培養(yǎng)基變黃，渾濁，細(xì)沙狀沉淀。
2、細(xì)胞碎片
消化不當(dāng)或者PH、滲透壓、溫度的變動(dòng)可能引起細(xì)胞死亡，產(chǎn)生碎片。
3、凋亡小體
程序性死亡細(xì)胞的核DNA在核小體連接處斷裂成核小體片段，形成濃縮的染色質(zhì)塊。隨著染色質(zhì)不斷聚集，核膜在核孔處斷裂，形成核碎片。同時(shí)由于不斷脫水，細(xì)胞質(zhì)不斷濃縮，細(xì)胞體積減小。整個(gè)細(xì)胞通過發(fā)芽、起泡等方式形成一個(gè)球形的突起，并在其根部絞窄而脫落形成一些大小不等，內(nèi)含胞質(zhì)、細(xì)胞器及核碎片的小體稱為凋亡小體。
4、支原體集落
支原體無細(xì)胞壁，直徑為0.1-0.3μm，且形態(tài)易變，極易通過除菌過濾器，單個(gè)的支原體無法顯微鏡觀察，目前已知的主要污染源是動(dòng)物血清、胰酶和已污染培養(yǎng)物的氣溶膠。來源廣泛、不易過濾、難以觀察，給細(xì)胞培養(yǎng)帶來了極大隱患。單個(gè)的支原體無法從顯微鏡下觀察，支原體集落卻可以被捕捉到。
5、黑膠蟲
談到黑膠蟲，大家應(yīng)該都對(duì)他神秘的“身世”有印象，目前多數(shù)黑膠蟲被鑒定為細(xì)菌，黑膠蟲最明顯的特征是運(yùn)動(dòng)，但是這里遠(yuǎn)慕要提醒大家，支原體集落，可能也會(huì)出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象。
6、血清中的物質(zhì)
血清反復(fù)凍融或者經(jīng)過滅活后，可能會(huì)產(chǎn)生“小黑點(diǎn)”，此外不要認(rèn)為會(huì)增多的一定是微生物污染，血清質(zhì)量不好，影響細(xì)胞生長，衰老細(xì)胞增多形成細(xì)胞碎片，也會(huì)呈現(xiàn)細(xì)胞長勢(shì)不佳，黑點(diǎn)增多的現(xiàn)象。
經(jīng)過分析，許多老師肯定又覺得混亂，細(xì)胞培養(yǎng)遇到“顆?！钡降兹绾螒?yīng)對(duì)？
首先，如果是微生物污染，不重要或者可替代的細(xì)胞，我們都建議丟棄，并排查污染來源，被污染的試劑也要丟棄，并且對(duì)使用的儀器和環(huán)境進(jìn)行除菌，比較重要的細(xì)胞，可以用含抗生素的緩沖液清洗過后，使用含較高濃度雙抗或三抗培養(yǎng)，嘗試消除，對(duì)于支原體和黑膠蟲污染，使用相應(yīng)的支原體清除劑和黑膠蟲清除劑進(jìn)行處理。
其他情況我們建議優(yōu)先排查血清質(zhì)量，特別是更換血清批次的，選擇質(zhì)量好的血清也是細(xì)胞培養(yǎng)成功與否的關(guān)鍵所在，除非實(shí)驗(yàn)特殊要求，其他情況下，不建議對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。而細(xì)胞正常凋亡產(chǎn)生的碎片，可以低俗離心分離完整細(xì)胞和細(xì)胞碎片，參考條件為300-500rpm 3min，根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整，可以用緩沖液清洗幾次。
最后需要注意的是某些細(xì)胞正常培養(yǎng)過程中會(huì)出現(xiàn)一些“顆?！蔽镔|(zhì)，屬于正常現(xiàn)象，小伙伴們一定要多查閱資料，熟悉培養(yǎng)細(xì)胞的特性。
