稱(chēng)重：
根據(jù)培養(yǎng)基配方的比例，將牛肉提取物，蛋白胨和NaCl準(zhǔn)確稱(chēng)入燒杯中。牛肉醬通常用玻璃棒挑出，在小燒杯或觀(guān)察杯中稱(chēng)重，溶于熱水，然后倒入燒杯中。也可以將其放在稱(chēng)量紙上，稱(chēng)量后直接放入水中。此時(shí)，如果將其稍加加熱，牛肉糊將與稱(chēng)量紙分離，然后立即將紙頁(yè)移開(kāi)。蛋白胨吸濕性強(qiáng)，稱(chēng)重時(shí)移動(dòng)迅速。另外，在混合藥物時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格防止藥物混合。羊角面包用于一種藥物，或在服用一種藥物后，將其洗滌并干燥，然后稱(chēng)重另一種藥物。不要在瓶子上蓋錯(cuò)蓋子。
融化：
在上述燒杯中，可以先添加少于所需量的水，用玻璃棒充分?jǐn)嚢?，然后在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解。藥物完全溶解后，加水至所需總體積。如果準(zhǔn)備了固體培養(yǎng)基，則將稱(chēng)量的瓊脂放入溶解的藥物中，然后加熱使其溶解。在瓊脂溶解過(guò)程中，需要攪拌以防止瓊脂糊破壞燒杯。最后補(bǔ)上丟失的水。
PH調(diào)整：
在調(diào)節(jié)pH值之前，首先要用精密pH試紙測(cè)量培養(yǎng)基的原始pH值。如果pH呈酸性，則用滴管將1mol / L NaOH滴加到培養(yǎng)基中，邊攪拌邊添加，并隨時(shí)用pH試紙測(cè)量其pH值直至pH達(dá)到7.6。否則，請(qǐng)使用1mol / L HCl進(jìn)行調(diào)整。請(qǐng)注意，不應(yīng)將pH值調(diào)節(jié)得太遠(yuǎn)，以免發(fā)生回調(diào)，否則會(huì)影響介質(zhì)中離子的濃度。
對(duì)于某些需要更準(zhǔn)確pH值的微生物，可以使用酸度計(jì)調(diào)節(jié)pH值（有關(guān)用法，請(qǐng)參閱相關(guān)說(shuō)明）。
過(guò)濾器：
趁熱時(shí)，用濾紙或多層紗布過(guò)濾以利于觀(guān)察結(jié)果。如果沒(méi)有特殊要求，則可以省略此步驟（此實(shí)驗(yàn)中無(wú)需過(guò)濾）。
包裝：
根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，所制備的培養(yǎng)基可以分為試管或錐形瓶。
在填充過(guò)程中，請(qǐng)注意不要讓培養(yǎng)基粘附在試管或瓶子的嘴上，以免污染棉塞并造成污染。
（1）液體包裝和包裝的高度優(yōu)選為試管的高度的約1/4。
（2）用于固體分裝和分裝的試管不得超過(guò)試管高度的1/5。滅菌后，應(yīng)將其制成斜坡。分開(kāi)的錐形瓶的體積不應(yīng)超過(guò)錐形瓶的一半。
（3）半固體分裝試管通常適合試管高度的1/3，并在滅菌后垂直凝結(jié)。
加塞：
填充培養(yǎng)基后，將棉塞放在試管或三角瓶的嘴上，以防止外部微生物進(jìn)入培養(yǎng)基并造成污染，并確保良好的通風(fēng)性能（將棉塞的方法固定在背面此實(shí)驗(yàn)）。
繃帶：
堵塞后，將所有試管用麻繩綁起來(lái)，然后在衛(wèi)生棉條上纏上一層牛皮紙，以防止滅菌過(guò)程中的冷凝水弄濕衛(wèi)生棉條。使用標(biāo)記指示介質(zhì)名稱(chēng)，組和日期。塞子裝滿(mǎn)牛皮紙后，用麻繩將繩子包裹成松散的結(jié)。使用時(shí)很容易解開(kāi)它。另外，使用標(biāo)記指示介質(zhì)名稱(chēng)，組和日期。
殺菌：
通過(guò)在121.3℃下以1.05kg / cm 2（15lb / in 2）高壓滅菌20分鐘，將上述培養(yǎng)基滅菌。如果由于特殊情況不能及時(shí)消毒，應(yīng)將其放在冰箱中暫時(shí)存放。
擱置斜面：
將滅菌后的試管培養(yǎng)基冷卻至約50℃，將試管的棉塞端置于玻璃棒上，傾斜面的長(zhǎng)度優(yōu)選為試驗(yàn)總長(zhǎng)度的一半以下。
無(wú)菌檢查：
將滅菌后的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中24-48小時(shí)，以檢查滅菌是否完成。
